多肽常见问题

通过研究肽的结构无法预测多肽在水中的溶解度。然而，Lys的ε-氨基和Arg的胍通常有助于估计肽的溶解度，特别是具有短序列的多肽。相反，含有Asp和Glu的酸性多肽往往不溶于水，但可以很容易地溶解在稀氨水或碱性缓冲液中。 以下某些基本特征可用于预测溶解度： 含有<5个氨基酸的多肽通常可溶于水溶液中。然而，如果整个序列由疏水残基组成，它将仅具有有限的溶解度或可能完全不溶。 含有> 25％带电氨基酸（E，D，K，R和H）和<25％疏水残基的亲水性多肽通常可溶于水溶液中。 其序列含有≥50％疏水残基的疏水性多肽可以完全或仅部分溶于水溶液中。如果它们不含有C，W或M残基，则应将这些多肽溶解在有机溶剂如DMSO中。如果它们确实含有这些氨基酸，则应将它们溶解在DMF，乙腈，异丙醇，乙醇，乙酸，4-8M盐酸胍（GdnHCl）或尿素中，然后小心地在水溶液中稀释。 包含> 75％疏水性氨基酸的疏水性多肽通常不溶于水性溶液。相反，必须使用非常强的溶剂如TFA或甲酸进行初始溶解。然而，当加入水性缓冲溶液中时，多肽可能会沉淀。因此，可能需要高浓度的有机溶剂或变性剂来溶解这些肽。 包含非常高比例（> 75％）的D，E，H，K，N，Q，R，S，T或Y的多肽可形成分子间氢键（交联），这可导致凝胶形成在浓缩的水溶液中。因此，多肽应该溶解在与最终实验相容的有机溶剂中。在将肽溶解在有机溶剂中后，应将溶液缓慢（逐滴）加入搅拌的缓冲水溶液中。当所得肽溶液开始显示浑浊时，达到溶解度极限。

多肽的溶解度主要由其极性决定。酸性多肽可以在碱性缓冲液中溶解，而碱性多肽可以溶解在酸性溶液中。含有大量疏水或极性不带电氨基酸的疏水性多肽和中性多肽应溶于少量有机溶剂如DMSO、DMF、乙酸、乙腈、甲醇，丙醇或异丙醇中，然后用水稀释。DMSO不应与蛋氨酸或游离半胱氨酸的多肽一起使用，因为它可能会氧化侧链。 在溶解多肽样品之前，先取少量，测试合成肽的溶解，并应将冻干的肽短暂离心以沉淀所有样品。您可能需要测试几种不同的溶剂，直到找到合适的溶剂。超声处理可用于增强溶解度。 具体操作步骤： 步骤1#：为每个酸性残基（Asp [D]，Glu [E]和C-末端-COOH）指定-1的值。接下来，为每个碱性残基（Arg [R]，Lys [K]，His [H]和N-末端-NH2）指定+1值，其他氨基酸指定0的值，然后计算多肽的总电荷。 步骤2#：如果多肽的总电荷为阳性，则多肽是碱性的。此时，尽可能尝试将多肽溶解在蒸馏水中。如果它不能溶于水，则尝试将多肽溶解在少量10-25％乙酸中。如果失败，加入TFA（10-50μl）溶解多肽，然后将其稀释至所需浓度。 [...]

多肽在绝大多数情况下是室温下运输，因为在密闭的小瓶中以冻干粉的形式高度稳定。但是多肽不应长时间保存在溶液中。 多肽储存指南：对于长期储存，多肽应以-20°C，或优选-80°C的冻干形式与干燥剂一起储存在密封容器中，以尽量减少多肽的降解。在这些条件下，多肽可以储存长达数年。这种类型的储存方式可防止细菌降解、氧化和二级结构的形成。 打开包装：在打开和称重之前，最好在干燥器中将多肽平衡至室温。没有这么做的话，会导致瓶子打开时形成冷凝（肽易于吸湿），这将降低肽的稳定性。 在溶解之前，将小瓶中的冻干肽以12,000×g离心20秒。这将有助于沉淀整个多肽样品以进行溶解。 多肽称重：快速称量所需量的多肽，并将所有未使用的多肽储存在-20°C或更低温度下，或者在多肽合成完成后进行分装。含有半胱氨酸，蛋氨酸，色氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺和N-末端谷氨酸的序列比其他多肽具有更短的保质期。

通常，诸如生物素和FITC等荧光染料可以在N末端或C末端引入。 我们建议采用N端修饰，因为它具有更高的成功率，更短的周转时间和易操作性。 多肽从C末端到N末端合成，而 N末端修饰是固相合成（SPPS）方案的最后一步，不需要更具体的耦合步骤。 相反，C末端修饰需要额外的步骤并且通常更复杂。 大多数染料是大的芳香分子。 掺入这种庞大的分子可能有助于避免标记和肽之间的相互作用。 这将有助于维持肽构象和生物活性。 建议使用灵活的间隔物，如Ahx（6碳连接体），使荧光标记更稳定。 否则，FITC可以在任何位置容易地与半胱氨酸硫醇部分或赖氨酸的氨基连接。