通常,诸如生物素和FITC等荧光染料可以在N末端或C末端引入。 我们建议采用N端修饰,因为它具有更高的成功率,更短的周转时间和易操作性。 多肽从C末端到N末端合成,而 N末端修饰是固相合成(SPPS)方案的最后一步,不需要更具体的耦合步骤。 相反,C末端修饰需要额外的步骤并且通常更复杂。
大多数染料是大的芳香分子。 掺入这种庞大的分子可能有助于避免标记和肽之间的相互作用。 这将有助于维持肽构象和生物活性。 建议使用灵活的间隔物,如Ahx(6碳连接体),使荧光标记更稳定。 否则,FITC可以在任何位置容易地与半胱氨酸硫醇部分或赖氨酸的氨基连接。